液相色谱柱使用及维护

    新的色谱柱在使用之前应该在自己的液相色谱仪，上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。

1.平衡色谱柱

(1)反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在一定比例的乙腈溶剂中的。一定要确保所使用的流动相和乙腈溶剂互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中，溶剂可能会挥发,因此在用流动相分析样品之前，应使用10~20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。

(2)硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。

(3)平衡过程中，将流速缓慢地提高。

(4)用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂纯度如果较低，则需要较长的时间来平衡)。

2.色谱柱的再生进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，最 好不使用高效液相色谱仪上的泵见下表。建议用来冲洗的溶剂体积

根据下列内容选择合适的再生方法:

极性固定相(如Si, NH, DIOL基色谱填料)的再生正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水

非极性固定相(如反相色谱填料RP一18, RP-一8，CN等)的再生水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

注意:在对NHz改性的色谱柱进行再生时，由于NHz可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0. 1mol/L (O. 1M)的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。如果简单的有机溶剂或水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0. 05mol/L稀硫酸冲洗非常有效。