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HPLC色谱柱的分类以及选择

发布日期:2021-12-03 发布人员: 浏览次数:147

       现代液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择中,现如今多采用细粒径以获得高分辨率。但是,细粒径填料的流体阻力往往很大,必须采用高压泵以将流动相强制输运通过柱子。所以,柱子必须能承受高压而不泄漏、不破坏才行。色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。

       常用的HPLC色谱柱多为硅胶基质填料的,又分正相色谱柱和反相色谱柱两大类。其它填料的色谱柱还有聚合物填料的和无机填料的,应用较少。

       1、正相色谱
       正相色谱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份zui先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

       2、反向色谱
       反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分zui先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。



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